發布日期：2022-10-09 點擊率：45
分光光度計具有重要應用，不管是在工業環境還是實驗室中，都有分光光度計的身影。為增進大家對分光光度計的認識，本文將對分光光度計的應用以及分光光度計使用注意事項予以介紹。如果你對分光光度計具有興趣，不妨繼續往下閱讀哦。
一、分光光度計用于核酸定量
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。每種核酸的分子構成不一，因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應的系數。如：1OD 的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經過上述系數的換算，從而得出相應的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實驗并非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現出的吸光值漂移越大。
事實上，分光光度計的設計原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內變化，即儀器有一定的準確度和精確度。如Eppendorf Biophotometer的準確度≤1.0%(1A)。這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測試時，離子濃度太高，也會導致讀數漂移如TE，可大大穩定讀數。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
二、分光光度計使用注意事項
1)為了防止光電管疲勞：不測定時必須將比色皿暗箱蓋打開，使光路切斷，以延長光電管使用壽命。
2)比色皿的使用方法：
①拿比色皿時：手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。
②清洗比色皿時：一般先用水沖洗，再用蒸餾水洗凈。如，比色皿被有機物沾污，可用鹽酸-乙醇混合洗滌液(1:2)浸泡片刻，再用水沖洗。不能用堿溶液或氧化性強的洗滌液洗比色皿，以免損壞。也不能用毛刷清洗比色皿，以免損傷它的透光面。每次做完實驗時，應立即洗凈比色皿。
③比色皿外壁的水用擦鏡紙或細軟的吸水紙吸干：以保護透光面。
④測定有色溶液吸光度時：一定要用有色溶液洗比色皿內壁幾次，以免改變有色溶液的濃度。另外，在測定一系列溶液的吸光度時，通常都按由稀到濃的順序測定，以減小測量誤差。
⑤在實際分析工作中：通常根據溶液濃度的不同，選用液槽厚度不同的比色皿，使溶液的吸光度控制在0.2～0.7。分光光度計的維護和保養分光光度計是精密儀器，正確安裝、使用和保養對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。
1.對儀器工作環境的要求分光光度計應安裝在穩定的工作臺上，(周圍不應有強磁場, 以防電磁干擾)，室內溫度應保持在(10～30)℃。室內應干燥，相對濕度宜控制在<85 %，室內應無腐蝕性氣體，光線不宜過強。
2.儀器保養和維護方法
(1)儀器工作電壓一般為220V，允許±10 %的電壓波動。為保持光源燈和檢測系統的穩定性，在電源電壓波動較大的實驗室最好配備穩壓器。
(2)為了延長光源使用壽命，在不用時不用開光源燈。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩定，應及時更換新燈。更換后要調節好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附，若不小心接觸過，要用無水乙醇擦拭。
(3)單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內，不能拆開，為防止色散元件受潮發霉，必須經常更換干燥劑。
(4)必須正確使用吸收池，保護吸收池光學面。
(5)光電轉換元件不能長時間曝光，應避免強光照射或受潮積塵。
以上便是此次小編帶來的分光光度計相關內容，通過本文，希望大家對分光光度計具備一定的了解。如果你喜歡本文，不妨持續關注我們網站哦，小編將于后期帶來更多精彩內容。最后，十分感謝大家的閱讀，have a nice day!
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