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　　色譜法是一種非自發(fā)、 需耗能(由高壓氣體或液體提供)的分離方法。被檢樣品混合物中的不同組分與互不相溶的流動(dòng)相( mobilephase )和固定相( stationary phase )之間的吸附、溶解、分配或離子交換等相互作用是存在著差異的,當(dāng)流動(dòng)相攜帶著多組分混合物流過(guò)固定相時(shí),使得性質(zhì)不同的各個(gè)組分隨流動(dòng)相移動(dòng)的速度產(chǎn)生了差異，隨著組分在兩相之間持續(xù)發(fā)生反復(fù)多次的作用,原來(lái)微小的差異累加產(chǎn)生了很大的效果，從而使各組分在柱內(nèi)移動(dòng)的同時(shí)逐漸分離。

　　例如某含A、B兩個(gè)組分的試樣,已知A組分在固定相中的分配系數(shù)(即與固定相的作用力)大于B ,當(dāng)樣品由流動(dòng)相攜帶進(jìn)入填充有固定相的色譜柱頭時(shí)( 如圖1-3所示) ,組分A、B是完全相混的。由于A組分在固定相中的溶解能力比B大,故A組分的移動(dòng)速度慢,經(jīng)過(guò)多次反復(fù)分配后,分配系數(shù)較小的B組分首先被帶出色譜柱,而分配系數(shù)較大的組分A則遲被帶出色譜柱,從而實(shí)現(xiàn)了分離。

　　在經(jīng)典色譜分離中,從色譜柱后流出的各組分用容器一-收集后，供進(jìn)一步的分析或使用。而在現(xiàn)代色譜儀器分析中,從色譜柱流出的被分離了的組分被流動(dòng)相”在線(xiàn)”導(dǎo)入檢測(cè)器,將各組分的濃度變化用電壓、電流信號(hào)記錄下來(lái),直接對(duì)每個(gè)組分進(jìn)行定性和定量分析。

　　(a)分配平衡的差異造成的A、 B兩不同組分的差速遷移;

　　(b)A和B在色譜系統(tǒng)中的分離和檢測(cè)過(guò)程;

　　(C)所記錄的色譜圖(c圖橫坐標(biāo)t1, t2, ..對(duì)應(yīng)于各自上方b圖中相應(yīng)的4個(gè)分離階段)

　　色譜分離的基本理論

　　色譜分離中,決定相鄰組分分離好壞的因素有兩個(gè):一是兩組分的保留值之差,即組分在色譜柱內(nèi)遷移速率的差異,它取決于各組分與固定相、流動(dòng)相的相互作用之差異;二是兩組分的峰寬,它反映了組分區(qū)帶在移動(dòng)過(guò)程中的擴(kuò)張程度，很大程度上取決于色譜的分離條件。圖1-7表示了A、B兩組分在分離過(guò)程中的不同時(shí)刻在色譜柱內(nèi)的相對(duì)位置和寬度(情況與圖1-3所示相同)。

　　當(dāng)分離到t2時(shí)A與B處于柱子中間部位,兩者譜帶較窄但尚未完全分離;分離到t時(shí),兩組分已接近柱尾，已分離完全,但組分區(qū)帶增寬不少。因而,色譜分離條件的優(yōu)化就是要設(shè)法使相鄰兩組分區(qū)帶遷移速率有較大的差異，但組分區(qū)帶在移動(dòng)過(guò)程中的擴(kuò)張要盡量小,從而使兩個(gè)組分區(qū)帶在向柱下游移動(dòng)時(shí),區(qū)帶分開(kāi)的速度大于它們自身的擴(kuò)張速度(圖1-7的情況)，這樣當(dāng)組分區(qū)帶從柱后流經(jīng)檢測(cè)器時(shí)，可以得到完全分離的兩個(gè)峰。